吉林Western Blot服务

一、WB原理及应用

WB是一种把电泳分离的蛋白组分从凝胶转移到一种固相支持物(NC膜或PVDF膜)上，而后采用抗体作为探针进行特定蛋白检测的技术。

WB主要应用：对细胞或组织提取的蛋白混合物(即总蛋白混合物)中的某一特异蛋白进行鉴别和半定量分析，旨在鉴别特异性蛋白的类型(如亚型、聚体、剪切体等)和蛋白表达量的变化。

依科生物WB服务内容：从蛋白提取开始，进行电泳转印、封闭、抗体孵育及ECL发光，最终进行基于图像灰度值的定量分析。

依科生物提供的实验报告中包括实验基本流程、蛋白定量原始数据、抗体孵育方式、图像灰度值分析及曝光原始图像。

二、WB实验流程

1、样本制备:蛋白提取、定量及变性。

2、电泳转印:蛋白SDS-page凝胶电泳后将蛋白转印至PVDF膜或者NC膜

3、封闭：使用封闭液封闭PVDF膜上未结合蛋白的小孔。

4、抗体孵育：一定条件下使一抗与目标蛋白结合，二抗与一抗结合。

5、发光成像：使用化学发光成像进行条带显色。

6数据处理：使用imageJ分析图像灰度值。

三、实验结果展示：

四、您需要提供的信息及物质

1、样本种属和指标名称

2、抗体，包括货号及说明书

3、实验样本

未用完的样本和抗体可以返还

五、样本收集和运输

1、组织样本

收集： 取材应在冰上进行，取材后组织用生理盐水冲洗干净，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织；

保存：吸干水渍并切小块，放入已标记的冻存管中，液氮速冻后，转运至-80℃冰箱，可以保存半年左右；

运输：使用大体积干冰运输；

2、细胞样本

贴壁收集：细胞培养或处理结束后，去除培养液，用预冷的PBS缓冲液快速冲洗细胞以去除培养基，而后加入少量预冷的PBS，使用细胞刮刀将细胞刮下，移于1.吉林5ml离心管中，4℃1500rpm离心去除上清；得到的沉淀为细胞样本。

悬浮细胞：细胞培养或处理结束后于4℃1500rpm离心去除上清培养基，加入预冷PBS轻柔吹打重悬细胞并转移至吉林1.5ml离心管中，4℃1500rpm离心去除上清PBS以洗去培养基，洗涤操作需要重复一次。最后离心得到的沉淀为细胞样本。

保存：液氮速冻后于-80 ℃冰箱中保存，可以保存半年左右。

运输：使用大体积干冰运输；

3、特殊样本：植物、细菌或者做过特殊处理的样本需要联系客服进行沟通。